肺部灌洗液的采集保存方法

 1 样本的采集

对拟要灌洗肺段经活检孔灌注2%利多卡因 1~2ml，做拟灌洗肺段局部麻醉。 将纤维支气管镜插入右肺中叶或左肺舌段的支气管，将其项端楔入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓注入37℃灭菌生理盐水，每次 30-50 毫升，总量 100-250 毫升，不应超过 300 毫升。每次注液后以-13.3~-19.95kpa 负压吸引装置吸引、回收至无菌痰液收集器中。一般回收率应达注入液量的 40%-60%。

回收液用双层无菌纱布过滤，除去粘液和较大杂质，记录总回收液量，收集装入离心管（50ml 细胞培养用无菌螺口管）或其他无菌容器中，置于冰水（0℃）中送到实验室。

在实验室中对灌洗液进行处理。以 400g 的速度常温离心 10 分钟，底部沉淀是细胞团，上清是含有细菌的悬浊液。尽量避免搅起底部细胞团，将上清转移到高速离心管中。若上清液较多，分多次离心收集与高速离心管中；之后以10,000g 速度离心 10 分钟，小心弃去上清。用 1ml 无菌的 PBS 或生理盐水，充分冲洗高速离心管底部，重悬高速离心管中的沉淀物（微生物）。将 1ml 洗涤液转移到 1.5ml 螺口管或 EP 管之中，做好标记（防止擦花），可放于-80度冰箱长期冻存（超过 1 年），或短期（1 月内）放于-20度冰箱中。

 2 样本的保存和寄送

将样本放入-80℃冰箱进行低温保存，若条件不允许，可短期（1 个月内）在 -20℃冰箱中冷冻保存。注意在样本冻存期间，请勿反复冻融。 送样时请尽量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保证运输过程中的低温条件（干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天）。在打包时先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙，为了保持冰盒中的低温环境，建议采用厚一点的泡沫盒。