人体样本的采集保存方法

根据实验的目的，确定选择受试者的条件，如年龄、体重、身体健康状况、有无特殊疾病等因素。根据考虑的因素，选择符合条件的受试者。向受试者交代实验的目的、过程、风险、收益及退出机制等，确保受试者理解全部实验内容， 待受试者签订知情同意书后开始取样

 1 样本的采集

1.1 人粪便样本的采集

让受试者将粪便排泄到干净的容器中，尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染。粪便要采集新鲜的，建议采集排泄中后部的粪便，并尽量挖取中部内侧的粪便作为样本。用无菌勺对新鲜的粪便进行挖取，将粪便样本放入无菌保存管中，样本需 1g 左右。采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。

1.2 小鼠粪便样本的采集

对于小鼠粪便样本的采集，建议采用拎尾法进行采集。小鼠排便后用灭菌的镊子夹取小鼠粪便，样本通常需 0.2g 以上，最少不低于 0.05g。样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存，如果样本珍贵，需要进行备份。

1.3 牙菌斑样本的采集

受试者无其他口腔疾病，无家族遗传疾病，无系统性疾病，无长期服药史， 近 3 个月内未服用抗生素服及免疫抑制剂。

取样前天晚上不要刷牙，第二天早上在未进食前取样。首先用无菌生理盐水冲洗收集区，棉卷隔湿，之后根据实验目的，用采集拭子分别采集牙齿的舌面、 唇面、龋齿损伤区等部位的牙菌斑。采集时，建议由同一操作者进行牙菌斑的采集操作。采集时在采集部位来回刮擦 3-4 次，之后翻转采集拭子，在同一部位继续进行刮擦 3-4 次，每个样本均采用一个采集拭子进行采集。采集完成后，将带有牙菌斑的采集拭子置于含有 1ml TE 溶液的无菌保存管中，掰断采集拭子后， 对保存管进行封口。置于冰上，待样本采集完后，尽快转移至实验室，放入-80℃ 冰箱进行保存。

1.4 唾液样本的采集

建议采集早上、未进食的受试者的唾液，若受试者吃过饭，则需在饭后 2 小时后再进行采样。采集前，先让受试者用 20mL 生理盐水漱口 1min，之后自然口含唾液数分钟后，由同一名操作者将灭菌 EP 管置于受检者下唇口腔黏膜，使唾液自然流入，采集非刺激性唾液样本 3ml，冷藏，放入-80℃冰箱进行保存。

1.5 皮肤样本的采集

受试者一周内不能使用任何抗生素类和甾醇类产品，采样前 12 小时内不能在采样部位上使用任何清洁用品（包括水洗）或护肤品，在采样前经医生检查并未患有特殊的皮肤病。

用采集拭子采集皮肤表面的微生物，取样时，握拭子的手请靠近拭子头部， 请勿超过折断处，以免污染样本。正常皮肤建议取样面积采用 5cm*5cm，最小取样面积需大于 4cm* 4cm。裸露皮肤（脸、手）微生物较为丰富，遮盖部位（腹 部、小腿）皮肤微生物数量较少，需适度加大取样面积。采集时，可将目标区域按从上至下分为 4 个长方形区域，保持拭子头与皮肤适度贴合，依次在每个区域往复擦拭 5 次以上；擦拭完一个区域后，务必将拭子旋转 90 度，再擦拭下一个区域，以确保整个拭子都能结合到足够的微生物样本。如果需采集有伤口或发炎有脓的皮肤样本，则在伤口或脓组织处直接取样。皮肤患处微生物一般较为丰富， 但过多的脓液、组织液会为后继的微生物基因检测带来一定干扰。建议同一个取样部位使用 2 根采集拭子，一根采集拭子的样本进行测序，另一份进行备份。

采集完成后，将采集拭子头折断放入保存管中。每一个采集拭子放入单独一个保存管。将带有样品的保存管放入-80℃冰箱进行冷冻存储。待全部样品采集好后，将带有样品的保存管放入冰盒中寄送到检测机构。

若无法实现低温保存，可以采用微基生物研发的微生物 DNA 常温保存液， 可以实现微生物样本的常温保存和运输。

 2 样本的保存和寄送

将样本放入-80℃冰箱进行低温保存，若条件不允许，可短期（1 个月内）在-20℃冰箱中冷冻保存。注意在样本冻存期间，请勿反复冻融。

送样时请尽量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保证运输过程中的低温条件（干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天）。在打包时先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙。最近天气较为炎热，建议采用厚一点的泡沫盒。