胃粘膜样本和组织样本的采集保存方法

 1 样本的采集

根据实验的目的，确定选择受试者的条件，如考虑年龄、性别、有无特殊疾病史等因素。根据考虑的因素，选择符合条件的受试者。向受试者交代实验的目的、过程、风险、收益及退出机制等，确保受试者理解全部实验内容，待受试者签订知情同意书后开始取样。

由于胃部粘膜样本和组织样本在取样时，取样的大小不同，后续的 DNA 抽提方法不同，因此采样方法也不相同。

1.1 胃部粘膜样本

在做胃镜检查前需禁食 12 小时，且未服用任何影响胃内菌群的药物。 用无菌的胃镜钳取胃部粘膜组织样本，胃窦样本取距离幽门 2-3cm 处的粘膜组织，胃体样本取距离胃食道结合部 10cm 处大弯侧的粘膜组织，样本大小至少为 2mm*1mm，置于无菌 EP 管或冻存管中，做好标记，放入液氮罐中进行保存。 当取材结束后，将样本转运到实验室，放入-80℃冰箱进行低温保存。注意在样本冻存期间，请勿反复冻融。

1.2 组织样本

取待测的组织样本放入微基生物提供的装有保存液的室温保存管中，样本加入后，保存液上升体积，不能超过原保存液体积的 1/3，在样本加入后，请充分 振荡，使样本全部浸没在保存液中。

装有保存管的样本，可在室温下存放 14 天，样本的菌群结构保持稳定。如
需长期保存，将放有样本的保存液，放入-80℃冰箱长期（1 年内）冻存，或短期（3 月内）放于-20℃冰箱中。注意在样本冻存期间，请勿反复冻融。

*如需保存活菌，需使用活菌保存管，并请尽快将样本及保存液放置于-80℃冰箱中，避免反复冻融。

 2 样本的保存和寄送

送样时请尽量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保证运输过程中的低温条件（干冰的挥发消耗量约为 3 公斤/天）。在打包时先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中间的空隙，为了保持冰盒中的低温环境，建议采用较厚的泡沫盒。

 参考文献

[1] Paroni Sterbini F., Palladini A., Masucci L., el al. Effects of Proton Pump Inhibitors on the Gastric Mucosa-Associated Microbiota in Dyspeptic Patients[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2016, 82: 6633-6644.

[2] Brandi G., Biavati B., Calabrese C., et al. Urease-positive bacteria other than Helicobacter pylori in human gastric juice and mucosa[J]. The American Journal of Gastroenterology, 2006, 101: 1756-1761.

[3] Sanduleanu S., Jonkers D., De Bruine A., et al. Non-Helicobacter pylori bacterial flora during acid-suppressive therapy: differential findings in gastric juice and gastric mucosa[J]. Aliment Pharmacol Ther , 2001, 15: 379-388.

[4] 王子恺. 胃癌、胃息肉患者胃内微生物群落结构的研究[D]. 解放军医学院，2014.