大鼠腹动脉采血建议

 1 大鼠腹动脉全血采集方法

1.1 麻醉及固定

将大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛以 0.3ml／100g 麻醉，也可用 3% 戊巴比妥纳， 0.2ml/100g 体重，注射麻醉剂后，直到身体全身变软，方可把大鼠仰卧固定在手术台上。

1.2 剪开腹部，寻找动脉

“V”字型剪开大鼠腹部皮肤，暴露内脏。用小滤纸片轻轻地将肠管及脂肪推向鼠左侧腹部，在脊柱前可见有两条较大的血管，靠右边颜色稍白的 1 条就是腹主动脉。为了便于观察采血量，将鼠按逆时针方向转动 90°(左手进针时顺时针转 90°) ，取头部向左横仰卧位。

1.3 进针

将采血针装好，针尖端向上，在髂骨总动脉分支前方进针沿着腹主动脉向心性缓慢向前移动，针尖插入深一些，防止刺破血管壁。由于针尾部分已被密闭乳 胶管包在里面，血液不会自动流出。

1.4 抽血

将所需不同检测血样的真空采血管向内有针头的套筒里缓慢地用力，使采血针刺入真空采血管中，血液便会流出，当血液量达到所要求的刻度时就可以将采 血管拔掉。这时针头又回到了胶管中，血液被止住，再用其他采血管进行采集， 这样便可以反复采集多管的血样进行不同项目的测试。采足血样后，将针头退出血管，一般采 3 种血样全过程只需 2 min。做代谢组检测时，一个样本需要 1-2ml 全血，之后进行血浆或血清处理，具体处理方法可以参照后面方法。

 2 血清

2.1 采集血样，静置 1 小时，血液凝固；

2.2 取液体部分进行离心分离，4oC，3000 转每分钟（rpm），5 分钟；

2.3 离心后取上层清液 （一般为淡黄色）， 每个样本至少需取 500μl 生物量，准确记录并进行编号。血样在室温放置不超过 3 个小时，4oC 保存不应超过 24小时，以防止血液中的代谢物发生变化。

2.4 冰冻样本，将血清样本至于-80oC 冰箱冰冻保存。注意事项：

1）采血过程中注意消毒，防止微生物污染；

2）采血时，如果用酒精消毒，建议擦干擦拭部位，待酒精完全挥发后，再取样；

3）采血时，如果用麻醉剂，建议用异氟醚，防止在 NMR 血清谱图中出现干扰峰；

4）采集全血时，如果使用真空采血管，请务必使用无预加抗凝剂的凝血管；

5）离心速率建议不宜过快，以免血细胞破碎；

6）准确记录每个样本收集的血清样本体积；

7）血清样本冰冻后避免反复冻融；

8）在运输样本过程提供冰盒干冰保证低温；

9）血清参考产率：30%-50%，即 1ml 全血大约能得到 0.3-0.5ml 血清。

10）用于 NMR 平台分析的样本如果储存在-80oC 环境超过 3 个月，则需要加入微生物抑制剂（建议添加叠氮化钠溶液（0.0025mol/L）20 微升）；用于 GC-MS、LC-MS 样本不应添加任何微生物抑制剂。

 3 血浆

3.1 采用抗凝管采集全血，NMR 平台宜用肝素钠抗凝管，GC-MS、LC-MS 平台宜 用 EDTA 抗凝管；

3.2 尽快进行血浆分离，室温 3000 转每分钟（rpm）离心 10 分钟；

3.3 取上层，0.2ml/管分装至 1.5ml 离心管中；

3.4 冰冻样本，将样本至于-80oC冰箱冰冻保存。足量干冰寄送。注意事项：

1）对于抗凝管的选择：
代谢组学实验检测推荐使用肝素钠抗凝管（因为柠檬酸是 TCA 循环中的重要物质， 使用柠檬酸钠抗凝剂会引入外源污染。而 EDTA 会影响 NMR 采谱。但肝素钠会对 RNA 相关的实验有负面作用，主要是因为会抑制反转录酶活性。请根据实验需求选择合适抗凝管。）

2）分装保存时推荐使用 1.5ml 离心管，因为螺口冻存管管帽内有一个橡胶垫圈， 目的是为了密封。但是长期在-80oC 或干冰低温条件下，橡胶圈垫会变得硬脆， 易脱落，导致密封不严，样本泄露。

3）血浆参考产率：≈50%，即 1ml 全血大约得到 0.5ml 血浆。